捷克国家图书馆的藏书超过700万册，每年获得约8万册新书。它每年向100多万用户提供服务，其中大多数是大学生或教师、学者、科学家，年均流通量约100万册。图书馆的服务面向所有15岁以上的读者。

        国家图书馆是捷克共和国最古老的公共图书馆之一，馆藏的规模远远超过国内任何其他图书馆。馆藏的价值使它成为欧洲乃至世界最重要的图书馆之一。它获取、保存、不断更新，并提供国内外文献访问。

        历史收藏大多来源于捷克和欧洲。手稿的主要部分是1366年布拉格第一所大学成立后查理四世捐赠一套抄本。此外，其中还有东方手稿和希腊纸莎草。

        手稿收藏包括许多独特的作品，例如，1085年为加冕第一位捷克国王弗拉迪斯拉夫而创作的维塞拉德法典，1312年创作于布拉格城堡圣乔治修道院草稿室中的圣徒受难记，来自14世纪上半叶圣经中的维利斯拉夫画像。

       国家图书馆保存着第谷·德·布拉赫图书馆中幸存的部分藏品、科米尼亚娜的藏品、伯纳德·波尔扎诺、F·X·萨尔达和简·维尔切克的个人图书馆，还有大型私人图书馆的藏品，其中有一些保存完好，例如，金斯基伯爵图书馆和布拉格洛布科维茨图书馆。

       经常被查阅的藏品之一是莫扎特纪念馆的藏品。它属于音乐部。

       斯拉夫图书馆是国家图书馆的一部分。它是一个公共的研究图书馆，是中欧最大的专门研究斯拉夫语的图书馆。除了原始的斯拉夫国家文学，这些文献的主题是面向来自世界各地的专业斯拉夫文学，主要集中在历史、哲学、语言学、文学科学、民俗学研究、民族学、政治学、社会学和艺术。它的收藏还包括A. F. 斯米里迪的个人图书馆的一部分。

       国家图书馆是CASLIN项目（一个连接捷克和斯洛伐克图书馆的图书馆信息网络）的主要推动者之一，该项目促成了建立捷克共和国联合目录的方案——CASLIN。许多重要的公共和科学图书馆一直在为这个方案做着贡献。